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        Vigorous Biotechnology

        威格拉斯生物技術

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        凋亡檢測技術概述

        細胞死亡相關機制,一直是生命科學許多領域研究的一個中心內容。凋亡和壞死,是常見的細胞死亡的兩種方式,它們有著截然不同的特征。凋亡是細胞程序性死亡的主要表現形式,是一個主動性的生理反應機制;壞死則是細胞對嚴重損傷的一種被動反應和變性過程。

        凋亡涉及一系列復雜的生理生化反應,最終導致細胞的解體。凋亡細胞的許多改變是特征性的,甚至是唯一與凋亡相關的。

        細胞與胞核固縮是凋亡早期發生的形態學變化,這些改變與細胞骨架的特異性解體有關。核固縮伴隨的染色體固縮,有顯著的形態學特點。碎裂的核片斷可以被胞膜包裹游離出細胞外,成為凋亡小體,并被周圍細胞吞噬。染色質的這些特征性變化,可以用顯微鏡直接觀察,或用一些熒光染料染色,在熒光顯微鏡下觀察或進行流式細胞分析。

        凋亡細胞會觸發激活一些DNA內切酶,將核小體間的DNA切割,引起細胞內DNA小片斷化。特征性的DNA片斷化,可以用簡單的瓊脂糖電泳觀察到。凋亡細胞固定和清洗后,會丟失部分小分子DNA,使細胞的染色體DNA含量降低,流式細胞分析會出現特征性的亞G1峰。酶切降解的染色體DNA也可以用一些方法標記,如TUNEL法等。

        凋亡細胞通常能夠維持膜結構的完整,特別在凋亡早期階段。而胞膜則在凋亡早期就喪失了其磷脂分子分布的非對稱性,導致磷脂酰絲氨酸暴露于胞膜外,使凋亡細胞易被吞噬細胞識別。暴露胞膜外的磷脂酰絲氨酸容易被相關方法檢測到,成為凋亡細胞的另一特征和檢測指標。

        細胞凋亡時,伴隨一系列蛋白酶學的改變,多種Caspase活性變化參與凋亡的啟動、執行過程。檢測Caspase活性變化,是分析凋亡發生機制和特征的另一方法。

        某些情況下,凋亡細胞不具有全部的凋亡特征,例如特征性的DNA片斷化不明顯,而出現DNA隨機降解;有時Caspase活性的改變與凋亡不相關,即凋亡時Caspase活性不變,而Caspase活性變化但無凋亡發生。總的來說,觀察凋亡時,應該觀察反映凋亡不同特征的幾個指標,綜合分析。

        本公司提供兩種凋亡檢測試劑盒,分別以凋亡細胞特征性核形態改變和暴露胞膜外的磷脂酰絲氨酸為檢測指標,特異性地對細胞凋亡進行定性和定量測定。

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